技術(shù)文章/ARTICLES

前期準(zhǔn)備

        利用ELISA試劑盒進(jìn)行臨床檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液（指

血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液

，陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定

的要求。

樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成

份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行
檢測(cè)的樣本，ELISA試劑盒及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及

時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    液體類標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、

細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000

轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離

心。
2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混

合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收

集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收

集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦

脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000

-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液

，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白

萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右

（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形

成，應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本
    切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液

氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入

一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿

器將標(biāo)本勻漿化。ELISA試劑盒離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)

收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。